Floresan Rezonans Enerji Transferi (FRET)
Floresan rezonans enerji transferi (FRET), donörün heyecanlı durum enerjisinin moleküller arası elektrikli çiftlerin etkileşimi yoluyla alıcı heyecanlı duruma aktarıldığı radyasyon olmayan bir enerji transfer sürecidir. Bu işlem fotonları içermez ve bu nedenle radyasyon değildir. Bu tahlil hızlı, hassas ve basit olma avantajlarına sahiptir.
FRET testinde kullanılan boya aynı olabilir. Ancak çoğu uygulamada, farklı boyalar gerçekten kullanılır. Kısacası, aydınlık rezonans enerjisinin transferi, donör grubu uyarıldığında bir çift dipolün donörden (boya 1) alıcıya (boya 2) aktarılmasıdır. Genel olarak, donör florofor grubunun emisyon spektrumu, alıcı grubunun absorpsiyon spektrumu ile örtüşmektedir. “İki florofor arasındaki mesafe uygun olduğunda (10 - 100 A), florofor enerjisinin donörden alıcıya aktarılması gözlemlenebilir.” Enerji transferi yöntemi, reseptörün kimyasal yapısına bağlıdır:
1. moleküler titreşime dönüştürülür, yani enerji transferinin aydınlık ışığı kaybolur. (Reseptör hafif bir söndürücüdür)
2. Emisyon reseptörün kendisinden daha yoğundur, bu da ikincil floresan spektrumunda kırmızıya kaymaya neden olur. ” (Reseptörler aydınlık yayanlardır).
Donör grubu (EDANS) ve alıcı geni (DABCyl), HIV proteazının doğal substratına eşit olarak bağlanır ve substrat bağlantısı kesilmediğinde, dabil quenle editlerini yapabilir ve daha sonra flor için saptanamaz hale gelebilir. HIV-1 proteaz bağlantısı üzerine, edimler artık dabcil tarafından söndürülmez ve edtans lusiferazlar daha sonra tespit edilebilir. Proteaz inhibitörlerinin mevcudiyeti, eDANS'ların floresan yoğunluğundaki değişikliklerle izlenebilir.
FRET peptitleri, peptidaz spesifikliğini incelemek için uygun araçlardır. Reaksiyon işlemi sürekli olarak izlenebildiğinden, enzim aktivitesini tespit etmek için uygun bir yöntem sağlar. Donör/alıcı tarafından peptit bağlarının hidrolizinden sonra üretilen parlaklık, nanomolar konsantrasyonlarda enzim aktivitesinin bir ölçüsünü sağlar. FRET peptidi sağlam olduğunda, dahili flaşın ani bir şekilde kaybolmasını gösterir, ancak donör/alıcının karşısındaki herhangi bir peptit bağı, sürekli olarak tespit edilebilen bir flaş serbest bırakır ve enzim aktivitesi nicelleştirilebilir.
Gönderme Zamanı: 2025-07-02