Biyolojik araştırmalarda, uzun diziye sahip polipeptitler genellikle kullanılır. Dizide 60'tan fazla amino asidi olan peptitler için, gen ekspresyonu ve SDS-PAGE genellikle bunları elde etmek için kullanılır. Ancak, bu yöntem uzun zaman alır ve son ürün ayırma etkisi iyi değildir.
Uzun peptit sentezi için zorluklar ve çözümler
Uzun peptitlerin sentezinde, her zaman bir problemle karşı karşıyayız, yani yoğuşma reaksiyonunun sterik engellemesi sentezdeki sekansın artmasıyla artar ve reaksiyon süresinin tamamlanması için reaksiyon süresinin ayarlanması gerekir. Bununla birlikte, reaksiyon süresi ne kadar uzun olursa, o kadar çok yan etki üretilir ve hedef peptitin bir kısmı oluşur. Bu tür tortular - eksik peptit zincirleri, uzun peptit sentezinde üretilen temel safsızlıklardır. Bu nedenle, uzun peptit sentezinde, üstesinden gelmemiz gereken temel sorun, amino asit yoğuşma reaksiyonunu daha kapsamlı ve dolu hale getirmek için yüksek kaliteli reaksiyon koşullarını ve reaksiyon yöntemlerini araştırmaktır. Ek olarak, reaksiyon süresini azaltın, çünkü reaksiyon süresi ne kadar uzun olursa, kontrol edilemeyen yan reaksiyonlar, yan ürünler o kadar karmaşık olur. Bu nedenle, aşağıdaki üç nokta özetlenmiştir:
Mikrodalga sentezi kullanılabilir: Sentez işleminde entegre edilmesi kolay olmayan bazı amino asitler için mikrodalga sentezi kullanılabilir. Bu yöntem dikkate değer sonuçlara sahiptir ve reaksiyon süresini büyük ölçüde azaltır ve iki anahtar yan ürün oluşumunu azaltır.
Fragman sentez yöntemi kullanılabilir: Bazı peptitlerin ortak sentez yöntemleri ile sentezlenmesi ve saflaştırılması kolay olmadığında, peptidin belirli bir segmentinde birkaç amino asidin tüm yoğuşmasını bir bütün olarak peptit zincirine benimseyebiliriz. Bu yöntem aynı zamanda sentezdeki birçok problemi de çözebilir.
Asilhidrazid sentezi kullanılabilir: Peptitlerin asilhidrazid sentezi, peptit bağlama yöntemini elde etmek için amid bağlarının oluşumu arasında N-terminal Cys peptit ve C-terminal polipeptid hidrazid kimyasal seçici reaksiyonun katı faz sentezinin bir yöntemidir. Peptit zincirindeki Cys konumuna dayanarak, bu yöntem tüm peptit zincirini çoklu dizilere ayırır ve bunları sentezler. Son olarak, hedef peptit sıvı faz yoğuşma reaksiyonu ile elde edilir. Bu yöntem sadece uzun peptidin sentez süresini büyük ölçüde azaltmakla kalmaz, aynı zamanda nihai ürünün saflığını önemli ölçüde arttırır.
Uzun peptit saflaştırma
Uzun peptitlerin özelliği kaçınılmaz olarak ham peptitlerin karmaşık bileşenlerine yol açar. Bu nedenle, uzun peptitleri HPLC ile saflaştırmak da bir zorluktur. Amiloid serisi polipeptit saflaştırma işlemi, çok fazla deneyimi emen ve uzun peptidin saflaştırılmasında başarılı bir şekilde kullanılır. Yeni ekipman benimseyerek, çoklu saflaştırma sistemlerinin karıştırılması, tekrarlanan ayırma ve diğer deneyim yöntemleri, uzun peptit saflaştırmasının başarı oranı büyük ölçüde iyileştirildi.
Gönderme: 2025-07-03