Yüksek hassasiyetli bir cihaz olan HPLC, kullanım sırasında doğru şekilde çalıştırılmadığı takdirde kolaylıkla bazı küçük problemlere yol açabilmektedir.En sık karşılaşılan sorunlardan biri sütun sıkıştırma sorunudur.Arızalı bir kromatografta sorun hızla nasıl giderilir?HPLC sistemi temel olarak bir rezervuar şişesi, bir pompa, bir enjektör, bir kolon, bir kolon sıcaklık odası, bir dedektör ve bir veri işleme sisteminden oluşur.Sistemin tamamı için sütunlar, pompalar ve dedektörler anahtar bileşenlerdir ve sorun yaşanmaya açık ana konumlardır.
Kolon basıncının anahtarı, HPLC kullanılırken yakından dikkat edilmesi gereken alandır.Kolon basıncının stabilitesi, kromatografik tepe şekli, kolon verimliliği, ayırma verimliliği ve alıkonma süresi ile yakından ilgilidir.Kolon basıncı stabilitesi, basınç değerinin stabil bir değerde stabil olduğu anlamına gelmez, bunun yerine basınç dalgalanma aralığının 345kPa veya 50PSI arasında olduğu anlamına gelir (kolon basıncı stabil olduğunda ve yavaşça değiştiğinde gradyan elüsyonunun kullanılmasına izin verir).Çok yüksek veya çok düşük basınç, kolon basıncı sorunudur.
HPLC arızalarına en yatkın olanlar ve çözümleri
1, yüksek basınç, HPLC kullanımında en yaygın sorundur.Bu, basınçta ani bir artış anlamına gelir.Genel olarak aşağıdaki nedenler vardır: (1) Genel olarak bunun nedeni akış kanalının tıkanmasıdır.Bu noktada parça parça incelememiz gerekiyor.A.Öncelikle vakum pompasının girişini kesin.Bu noktada PEEK tüpü sıvıyla dolduruldu, böylece sıvının isteğe göre damlayıp damlamadığını görmek için PEEK tüpü solvent şişesinden daha küçüktü.Sıvı damlamıyorsa veya yavaş damlıyorsa solvent filtre kafası tıkalı.Tedavi: Yarım saat boyunca %30 nitrik asitte bekletin ve ultra saf su ile durulayın.Sıvı rastgele damlıyorsa solvent filtre kafası normaldir ve kontrol ediliyordur;B.Mobil fazın kolondan geçmemesi için Tahliye vanasını açın ve basınç önemli ölçüde düşmezse filtre beyaz başlığı tıkanır.Tedavi: Filtrelenen beyaz noktalar çıkarıldı ve yarım saat boyunca %10 izopropanol ile sonikasyona tabi tutuldu.Basıncın 100PSI'nin altına düştüğü varsayılırsa filtrelenen beyaz kafa normaldir ve kontrol edilmektedir;C.Kolonun çıkış ucunu çıkarın, basınç düşmezse kolon tıkanmıştır.Tedavi: Tampon tuz tıkanıklığı ise basınç normale dönene kadar %95 oranında durulayın.Eğer tıkanıklık daha yüksek oranda korunmuş bir malzemeden kaynaklanıyorsa, normal basınca doğru ilerlemek için mevcut hareketli fazdan daha güçlü bir akış kullanılmalıdır.Yukarıdaki yönteme göre uzun süreli temizleme basıncı düşmüyorsa kolonun giriş ve çıkışının tam tersine cihaza bağlı olduğu düşünülebilir ve kolon mobil faz ile temizlenebilir.Bu durumda, kolon basıncı hala düşmemişse, kolon giriş elek plakası yalnızca değiştirilebilir, ancak çalışma iyi olmadığında kolon etkisinin azalmasına yol açmak kolaydır, bu nedenle daha az kullanmaya çalışın.Zor problemler için kolonun değiştirilmesi düşünülebilir.
(2) Yanlış akış hızı ayarı: Doğru akış hızı sıfırlanabilir.
(3) Yanlış akış oranı: farklı akış oranlarının viskozite indeksi farklıdır ve daha yüksek viskoziteye sahip akışın karşılık gelen sistem basıncı da daha büyüktür.Mümkünse daha düşük viskoziteli solventler değiştirilebilir veya yeniden ayarlanıp hazırlanabilir.
(4) Sistem basıncı sıfır sapması: sıvı seviye sensörünün sıfırını ayarlayın.
2, basınç çok düşük (1) genellikle sistem sızıntısından kaynaklanır.Ne yapmalı: Her bir bağlantıyı, özellikle de kolonun her iki ucundaki arayüzü bulun ve sızıntı alanını sıkın.Direği çıkarın ve PTFE filmini uygun kuvvetle sıkın veya hizalayın.
(2) Gaz pompaya girer, ancak bu sırada basınç genellikle dengesizdir, yüksek ve düşük.Daha ciddisi, pompa sıvıyı ememeyecektir.Tedavi yöntemi: Temizleme vanasını açın ve 3~5ml/dak akış hızında temizleyin.Aksi takdirde, özel bir iğneli tüp kullanılarak egzoz valfindeki hava kabarcıkları aspire edildi.
(3) Mobil faz çıkışı yok: rezervuar şişesinde mobil faz olup olmadığını, lavabonun mobil faza daldırılıp daldırılmadığını ve pompanın çalışıp çalışmadığını kontrol edin.
(4) Referans valfi kapalı değil: referans valfi yavaşlamanın ardından kapatılır.Genellikle 0,1'e düşer.Referans valfi kapatıldıktan sonra ~ 0,2 mL/dak.
Özet:
Bu yazıda yalnızca sıvı kromatografisinde sık karşılaşılan sorunlar analiz edilmektedir.Elbette pratik uygulamamızda daha başka sorunlarla da karşılaşacağız.Arıza gidermede aşağıdaki ilkeleri izlemeliyiz: varsayımsal faktör ile sorun arasındaki ilişkiyi belirlemek için bir seferde yalnızca bir faktörü değiştirin;Genel olarak sorun giderme amacıyla parça değiştirirken, israfı önlemek için sökülen sağlam parçaları tekrar yerine koymaya dikkat etmeliyiz;İyi bir kayıt alışkanlığı oluşturmak, arıza giderme başarısının anahtarıdır.Sonuç olarak, HPLC kullanırken numune ön işlemine ve ekipmanın uygun şekilde çalıştırılmasına ve bakımına dikkat etmek önemlidir.
Gönderim zamanı: 18 Eylül 2023