Limulus reaktifi tripeptit/Endotoksin Substratının Çalışma Prensibi ve Hazırlanması

Limulus reaktifi tripeptidi, at nalı yengeci kan hücresi lizatından ekstrakte edilen veya yapay olarak sentezlenen spesifik bir diziye sahip bir tripeptid maddesidir. Limulus reaktifi tripeptidi, Gram-negatif bakterilerin bileşenlerini tespit etmek ve ölçmek için kantitatif analiz (bakteriyel endotoksin testi gibi) için kullanılan kromojenik bir substrattır.—Endotoksinler. Endotoksinler tarafından aktive edilen enzimler etki ettiğinde renkli bir bileşik (p-nitroanilin gibi) salınır ve renk yoğunluğunun ölçülmesine ve endotoksin içeriği ile ilişkilendirilmesine olanak tanır.

Çalışma Prensibi

Endotoksin Aktivasyonu: Endotoksinlerin varlığında at nalı yengecindeki amebositler enzim salgılayarak pıhtılaşma kaskadını tetikler.

Enzim Etkisi: Aktive edilen enzim (genellikle pıhtılaşma enzimi) daha sonra kromojenik bir substrat üzerinde etki gösterir.

Kromojenik Reaksiyon: Enzim substratı parçalayarak p-nitroanilin (pNA) adı verilen sarı bir bileşiği açığa çıkarır.

Kantitatif Analiz: Sarı rengin yoğunluğu numunedeki endotoksin içeriğiyle orantılıdır ve genellikle 405 nm absorbansta bir spektrofotometre kullanılarak ölçülür.

Hazırlama Yöntemleri

Limulus reaktifi tripeptit, hazırlama açısından iki yaklaşımla elde edilebilir.

1. Limulus kan hücrelerinden doğal bileşenlerin çıkarılması ve ayırma ve saflaştırma yoluyla aktif tripeptidin elde edilmesi.

2. Tripeptit yapısını tam olarak kontrol ederek belirli amino asit dizilerini sırayla bağlamak için katı faz sentez teknolojisinin kullanılması.

Limulus'un koruma politikaları nedeniyle (Zhejiang, Fujian, Guangdong ve Guangxi gibi eyaletler burayı "eyalet anahtar korumalı su yaban hayatı" olarak listeliyor / Hong Kong, 2012'nin sonunda dip trolünü yasaklayan düzenlemeler yayınladı) ve çıkarma süreci karmaşık ve zorlu olduğundan, ilk yöntemin maliyeti nispeten yüksektir. Bu nedenle katı faz sentezi artık yaygın olarak kullanılmaktadır. Belirli amino asit dizilerinin sırayla bağlanmasıyla tripeptit yapısı hassas bir şekilde kontrol edilebilir. Bu yöntem yalnızca ürünün stabilitesini ve tutarlılığını sağlamakla kalmaz, aynı zamanda büyük ölçekli üretime olanak tanır ve ilaç endüstrisinin reaktiflerin test edilmesine yönelik ihtiyaçlarını karşılar.