Arka plan
Afamelanotide olarak da bilinen Melanotan I, farmasötik araştırmalarda giderek daha önemli bir rol oynamaya hazırlanan 13 amino asitten oluşan doğrusal bir polipeptittir. Melanotan I'in başlıca İngilizce isimleri Melanotan-1 ve Afamelanotide'dir. α-melanosit uyarıcı hormon α-MSH)'nin sentetik bir analoğu olan Melanotan I, eritropoietik protoporfirinin neden olduğu ışığa duyarlılık bozukluklarını tedavi etmek için kullanılabilir. Şu anda çoğu Melanotan I ürünü yalnızca araştırma amaçlı olarak etiketlenmiştir ve henüz insan uygulamasına yönelik değildir. Geleneksel katı faz sentezinde reçine seçimi, ürünün bağlanma verimliliğini ve nihai saflığını önemli ölçüde etkiler.
Temel Bilgi
Çince Adı: Melanotan 1
İngilizce Adı: Melanotan-1
Şirket No.: GT-A006
CAS Numarası: 75921-69-6
Sıra: SYS{Ne}EH{D-Phe}RWGKPV-NH2
Moleküler Formül: C78H111N21O19
Molekül Ağırlığı: 1646.88
Hazırlama yöntemi
BEN. Fmoc-Val-Amino Reçinesinin Hazırlanması
Adım 1:0,45 mmol/g ikame derecesine sahip 11,11 g (5 mmol) Ramage Amid AM reçinesini tartın ve bunu bir katı faz reaktörüne ekleyin. Reçineyi 30 dakika şişirmek için DCM ekleyin, ardından boşaltın. DMF ile üç kez yıkayın. %20 piperidin (h/h) içeren bir DMF çözeltisi ekleyin ve 5 dakika reaksiyona girin. Başka bir %20 piperidin DMF solüsyonu ekleyin ve arada bir DMF yıkaması ile 10 dakika reaksiyona girin. Reaksiyon tamamlandıktan sonra boşaltın ve üç kez DMF ile yıkayın.
Adım 2:5,09 g Fmoc-Val-OH, 2,02 g HOBT (1-hidroksibenzotriazol) ve 2,32 ml DIC (N,N'-diizopropilkarbodiimid) DMF içinde 0°C'de eritilir. Çözünmenin tamamlanmasından sonra karışımı reaksiyon kolonuna ekleyin ve oda sıcaklığında 1 saat reaksiyona sokun. Negatif bir sonuç sağlamak için ninhidrin testini kullanarak reaksiyonun ilerlemesini izleyin. Reaksiyon tamamlandıktan sonra Fmoc-Val-amino reçinesi elde etmek için DMF ile üç kez yıkayın.
II. Melanotan I'in Tamamen Korumalı Reçine Peptitinin Hazırlanması.
Adım 1:Yukarıdaki Fmoc-Val-aminoresine DMF çözeltisi (hacim oranı) içinde %20 piperidin ekleyin. 5 dakika reaksiyona girin, ardından DMF solüsyonuna %20 piperidinin başka bir kısmını ekleyin ve 10 dakika reaksiyona girin. Aralık sırasında DMF ile bir kez yıkayın. Reaksiyon tamamlandıktan sonra vakum altında kurutun ve üç kez DMF ile yıkayın.
Adım 2:5.06g Fmoc-Pro-OH, 2.02g HOBT (1-hidroksibenzotriazol) ve 2.32ml DIC'yi (N,N'-diizopropilkarbodiimid) DMF içinde 0°C'de çözün. Çözünmenin tamamlanmasından sonra karışımı reaksiyon kolonuna ekleyin ve oda sıcaklığında 1 saat reaksiyona sokun. Negatif sonuçlar elde edilene kadar ninhidrin testini (Kaiser testi) kullanarak reaksiyonun ilerlemesini izleyin. Tamamlandığında, Fmoc-Pro-Val-aminoresin elde etmek için DMF ile üç kez yıkayın.
3. Adım:Adım 2'de açıklanan yöntemi izleyerek, her bir amino asidi Melanotan I dizisine göre sırayla bağlayın. Ac-Ser(tBu)-OH birleştirme reaksiyonunun tamamlanmasından sonra, üç kez DMF ile, üç kez DCM (diklorometan) ve üç kez metanol ile yıkayın. 23.89 g tamamen korunmuş Melanotan I reçineye bağlı peptid elde etmek için vakum altında kurutun.
III. Melanotan I Ham Peptidinin Hazırlanması
23.89 g tamamen korunmuş Melanotan I reçineye bağlı peptit yuvarlak dipli bir şişeye yerleştirildi. 0°C'de, 250 ml önceden hazırlanmış bir bölünme kokteyli (hacimce TFA:tiyoanizol:fenol:triizopropilsilan:su = 82.5:7.5:5:3:2'den oluşur) karıştırılarak yavaş yavaş ilave edildi. Karışım düşük sıcaklıkta 0.5 saat reaksiyona sokuldu, ardından oda sıcaklığında 2 saat reaksiyona tabi tutuldu. Bölünme çözeltisi daha sonra vakum altında süzüldü. Bu çözelti, karıştırılarak yavaş yavaş 2 L buz soğukluğunda susuz dietil etere ilave edildi. Ham peptid filtrasyon yoluyla izole edildi, üç kez buz soğukluğunda dietil eter ile yıkandı ve 8.55 g Melanotan I ham peptidi elde edildi.
IV. Melanotan I Saflaştırılmış Peptidin Hazırlanması
Adım 1:Ham Melanotan I peptidini 100 ml saf suda çözün ve ham bir peptid çözeltisi elde etmek için 0,45 μm'lik bir membrandan filtreleyin.
Adım 2:Yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) kullanarak ham Melanotan I peptidini saflaştırın. Mobil faz A (%0,05 trifloroasetik asit sulu çözeltisi) ve mobil faz B (asetonitril içinde %0,05 trifloroasetik asit) içeren bir DAC-HB50 dinamik eksenel sıkıştırma kolonu kullanın. Ayırma ve saflaştırma için degrade elüsyonu gerçekleştirin. Numuneyi bir UV dedektörü kullanarak tespit edin ve hedef zirveye karşılık gelen peptit çözümünü kesirler halinde toplayın.
3. Adım:HPLC saflaştırmasından sonra saflığı %99'u aşan 180 ml Melanotan I trifloroasetat çözeltisi elde edin. Çözeltiyi döner buharlaştırma yoluyla 50 ml'ye kadar konsantre edin.
Adım 4:Kromatografi kolonunu deiyonize suyla dengeleyin ve 50 ml saflaştırılmış Melanotan I trifloroasetat çözeltisi (saflık >%99) yükleyin. %2 asetik asit sulu çözelti sisteminde 50 dakika elüte edin. Toplanan hedef ürünü döner buharlaştırma yoluyla 80 ml'ye kadar konsantre edin. Sonuçta %32,33 verimle 5,33 g Melanotan I saflaştırılmış peptid elde etmek için dondurarak kurutma öncesi kurutma ve dondurarak kurutma gerçekleştirin.
Gönderim zamanı: 2026-01-05