Protein ekspresyonuna genel bakış

ProteinExpression, hedef geni yapay bir vektöre üreme ve daha sonra proteini heterolog sistemde ifade etmek için alıcı hücreye veya hücresiz sisteme sokma teknolojisini ifade eder.

Protein ekspresyonu, doğal proteinlerin elde edilmesi zor olduğu sorunu çözebilir. 1970'lerde heterolog protein ekspresyonunun ilk kurulmasından bu yana, binlerce rekombinant protein başarıyla ifade edilmiştir, bu da biyoteknoloji ve biyomedikal araştırma ve endüstrinin sürekli gelişimini etkili bir şekilde teşvik etmektedir.

Amaç:

Protein ekspresyonu yoluyla, önce doğal kaynaklardan elde edilmesi zor proteinler elde etmek mümkündür.

İkincisi, protein ekspresyon ürünlerinin büyük parti ve yüksek saflığı sadece hedef proteinin analizini kolaylaştırmakla kalmaz, aynı zamanda maliyeti de büyük ölçüde azaltır.

Daha da önemlisi, rekombinant proteinler genellikle konakçı hücrenin yüksek bir biyogüvenliğini belirtmek için seçilir, böylece patojenik konakçının bazı potansiyel biyogüvenlik risklerinden kaçınır.

Yöntem:

Esas olarak gen fragmanı replikasyonu, ifade sistemine giriş, uyarılmış ekspresyon, ürün saflaştırma ve analiz süreçlerini içerir.

Protein ekspresyonuna genel bakış

Sınıflandırma:

Protein ekspresyon sistemleri genellikle aşağıdakilere ayrılabilir:

1. Nükleer ekspresyon sistemi: Escherichia coli, net genetik arka plan, uygun üreme, düşük maliyet ve yüksek ekspresyon avantajlarına sahip en yaygın protein ekspresyon sistemidir. Bununla birlikte, çeviri modifikasyon mekanizması yoktur ve protein ekspresyonunu değiştirmek için glikosilasyon veya özel seçim noktası bölünmesi için uygun değildir. Bacillus subtilis de protein ekspresyonu için kullanılabilir ve avantajları, yavaş yavaş dikkat çeken güçlü metabolik ekspresyon yeteneği ve düşük proteaz aktivitesidir.

2. Ökaryotik ekspresyon sistemi: Ökaryotik proteinlerin doğal aktivitesine daha yakın olan translasyondan sonra belirli bir glikosilasyon derecesi elde edilebilir. Esas olarak dahildir. ① Maya ifade sistemi (yaygın kırmızı maya, demleme maya, vb.), Maya yüksek yoğunluklu yumuşak olabilir, translasyondan sonra modifiye edilebilir, prokaryotik ve ökaryotik konakçı hücrelerin avantajlarına sahiptir ve aynı zamanda iyi bir protein ekspresyon sistemidir. ② Böcek hücresi ekspresyon sistemi: eksojen genler, ekspresyon için bakulovirüs vektörü ile böcek hücrelerine transfekte edilir. Membran proteinleri, makromoleküler proteinler, protein kinazlar ve prokaryotik sistemde eksprese edilmesi zor olan diğer proteinler için uygun olan ökaryotik proteinler için yüksek bir ekspresyon sistemidir. Memeli Memeli Hücre İfade Sistemi: Memeli hücrelerinin çeviri ve dekorasyon verimliliği maya ve böcek hücre sistemlerinden çok daha yüksektir. Memeli hücrelerinin yapısı ve fonksiyonu doğal ökaryotik proteinlere daha yakındır, ancak ekspresyon seviyesi düşüktür ve maliyet yüksektir.

3. Hücre içermeyen ekspresyon sistemi: Hedef proteinler doğrudan parçacıklardan ve PCR ürünlerinden eksprese edilebilir ve ekspresyon sistemi Escherichia coli, buğday embriyoları, tavşan retikülositleri, vb.