Rekombinant protein antijenleri genellikle bazıları dizi epitopları ve bazıları yapısal epitoplar olan birkaç farklı epitopa sahiptir. Hayvanları denatüre antijenlerle aşılamakla elde edilen poliklonal antikorlar, bireysel epitoplara özgü antikor karışımlarıdır ve genel olarak doğal yapıları veya denatüre hedef proteinleri tespit etmek için kullanılabilir. Denatüre proteinleri immünojenler olarak kullanmanın bir yan yararı, denatüre proteinlerin daha immünojenik olma eğiliminde olması ve hayvanlarda güçlü bir bağışıklık tepkisini uyarabilmesidir.
Escherichia coli'nin ifade sistemi genellikle antijenik amaçlar için seçilir, çünkü zaman ve para açısından en pahalı sistemdir. Hedef protein ekspresyonunun olasılığını ve saflaştırmanın rahatlığını iyileştirmek için, bazen belirli bir alan gibi hedef proteinin sadece küçük bir parçası ifade edilir.
Proteinlerin üç boyutlu yapısı
Bir proteinin spesifik alanı
Antikor preparatının amacı sadece WB tespiti için ise, antijen olarak sentetik küçük peptidi kullanmak ekonomik ve hızlıdır, ancak uygunsuz peptit segmenti seçimi nedeniyle zayıf immünojenisite veya rejenite riski vardır. Antikor preparatı uzun bir süre gerektirdiğinden, deneyin başarı oranını sağlamak için polipeptit antijeni kullanılarak antikorlar hazırlamak için genellikle iki veya üç farklı peptit segmenti seçilir.
Aşılama için polipeptit antijeninin saflığının%80'den fazla olması gerekir. Daha yüksek bir saflık teorik olarak daha iyi özgüllükle antikorlar elde edebilse de, uygulamalarda, hayvanlar her zaman çok sayıda spesifik olmayan antikor üretir, böylece antijen saflığının faydalarını maskeler.
Ek olarak, küçük peptitlerden antikorların hazırlanması, immünojenisitesini arttırmak için uygun taşıyıcı antijene çapraz bağlanmalıdır. İki yaygın antijenik taşıyıcı KLH ve BSA'dır.
Gönderme: 2025-07-03