Floresan rezonans enerji transferi (FRET)
Floresan rezonans enerji transferi (FRET), vericinin uyarılmış durum enerjisinin, moleküller arası elektrik çiftlerinin etkileşimi yoluyla alıcının uyarılmış durumuna aktarıldığı, ışınımsız bir enerji transfer sürecidir.Bu süreç fotonları içermez ve bu nedenle ışınımlı değildir.Bu tahlilin hızlı, hassas ve basit olması gibi avantajları vardır.
FRET tahlilinde kullanılan boya aynı olabilir.Ancak çoğu uygulamada aslında farklı boyalar kullanılır.Kısaca ışık rezonans enerjisinin transferi, donör grubu uyarıldığında bir çift dipolün donörden (boya 1) akseptöre (boya 2) aktarılmasıdır.Genel olarak Donör florofor grubunun emisyon spektrumu, Akseptör grubunun absorpsiyon spektrumu ile örtüşmektedir."İki florofor arasındaki mesafe uygun olduğunda (10 — 100 A), florofor enerjisinin donörden alıcıya aktarımı gözlemlenebilir."Enerji transfer yöntemi reseptörün kimyasal yapısına bağlıdır:
1. Moleküler titreşime dönüşür, yani enerji aktarımının parlak ışığı kaybolur.(Reseptör bir ışık söndürücüdür)
2. Emisyon reseptörün kendisinden daha yoğundur ve ikincil floresans spektrumunda kırmızıya kaymaya neden olur.”(Reseptörler ışık yayıcılardır).
Donör grubu (EDANS) ve alıcı gen (DABCYL), HIV proteazın doğal substratına eşit şekilde bağlıdır ve substrat bağlantısı kesilmediğinde DABCYL, EDANS'ı söndürebilir ve daha sonra flor için tespit edilemez hale gelebilir.HIV-1 proteaz bağlantısı kesildiğinde, EDANS artık DABCYL tarafından söndürülmez ve EDANS lusiferazları daha sonra tespit edilebilir.Proteaz inhibitörlerinin mevcudiyeti EDANS'ın floresans yoğunluğundaki değişikliklerle izlenebilir.
FRET peptidleri, peptidazın spesifik olmamasını incelemek için uygun araçlardır.Reaksiyon süreci sürekli olarak izlenebildiğinden enzim aktivitesinin tespit edilmesi için uygun bir yöntem sağlar.Donör/alıcı tarafından peptit bağlarının hidrolizinden sonra üretilen parlaklık, nanomolar konsantrasyonlarda enzim aktivitesinin bir ölçüsünü sağlar.FRET peptidi sağlam olduğunda, dahili flaşın aniden ortadan kaybolduğunu gösterir, ancak donör/alıcının karşısındaki herhangi bir peptit bağı koptuğunda, sürekli olarak tespit edilebilen ve daha sonra enzim aktivitesi ölçülebilir bir flaş açığa çıkarır.
Gönderim zamanı: Ağu-14-2023