Biyolojik araştırmalarda genellikle uzun dizili polipeptitler kullanılır.Dizide 60'tan fazla amino asit içeren peptidler için bunları elde etmek amacıyla genellikle gen ifadesi ve SDS-PAGE kullanılır.Ancak bu yöntem uzun zaman alır ve nihai ürün ayırma etkisi iyi değildir.
Uzun peptit sentezine yönelik zorluklar ve çözümler
Uzun peptidlerin sentezinde her zaman bir sorunla karşı karşıya kalırız, yani sentezdeki dizinin artmasıyla yoğunlaşma reaksiyonunun sterik engeli artar ve reaksiyonun tamamlanması için reaksiyon süresinin ayarlanması gerekir.Ancak reaksiyon süresi ne kadar uzun olursa, o kadar fazla yan etki ortaya çıkar ve hedef peptidin bir kısmı oluşur.Bu tür kalıntılar - eksik peptid zincirleri, uzun peptid sentezinde üretilen önemli safsızlıklardır.Bu nedenle, uzun peptidin sentezinde aşmamız gereken temel sorun, amino asit yoğunlaşma reaksiyonunu daha kapsamlı ve eksiksiz hale getirmek için yüksek kaliteli reaksiyon koşullarını ve reaksiyon yöntemlerini keşfetmektir.Ayrıca reaksiyon süresini kısaltın, çünkü reaksiyon süresi ne kadar uzun olursa, yan reaksiyonlar o kadar kontrol edilemez olur ve yan ürünler o kadar karmaşık olur.Bu nedenle aşağıdaki üç nokta özetlenmiştir:
Mikrodalga sentezi kullanılabilir: Sentez sürecinde karşılaşılan ve entegrasyonu kolay olmayan bazı amino asitler için mikrodalga sentezi kullanılabilir.Bu yöntemin dikkate değer sonuçları vardır ve reaksiyon süresini büyük ölçüde azaltır ve iki önemli yan ürünün oluşumunu azaltır.
Parça sentezi yöntemi kullanılabilir: Bazı peptidlerin yaygın sentez yöntemleriyle sentezlenmesi zor olduğunda ve saflaştırılması kolay olmadığında, peptidin belirli bir bölümündeki birkaç amino asidin tümünün peptid zincirine yoğunlaşmasını bir bütün olarak benimseyebiliriz.Bu yöntem aynı zamanda sentezdeki birçok sorunu da çözebilir.
Asilhidrazid sentezi kullanılabilir: Peptitlerin asilhidrazid sentezi, peptit bağlama yöntemini elde etmek için amid bağlarının oluşumu arasında N-terminal Cys peptidi ve C-terminal polipeptit hidrazid kimyasal seçici reaksiyonunun katı fazda sentezine yönelik bir yöntemdir.Cys'in peptid zincirindeki konumuna bağlı olarak bu yöntem, tüm peptid zincirini birden fazla diziye böler ve bunları sırasıyla sentezler.Son olarak hedef peptid, sıvı fazda yoğunlaşma reaksiyonu yoluyla elde edilir.Bu yöntem yalnızca uzun peptidin sentez süresini büyük ölçüde azaltmakla kalmaz, aynı zamanda nihai ürünün saflığını da önemli ölçüde artırır.
Uzun peptid saflaştırması
Uzun peptidlerin özelliği kaçınılmaz olarak ham peptidlerin karmaşık bileşenlerinin oluşmasına yol açmaktadır.Bu nedenle uzun peptitlerin HPLC ile saflaştırılması da zorlu bir iştir.Amiloid serisi polipeptitlerin saflaştırma işlemi, birçok deneyimi emer ve uzun peptitlerin saflaştırılmasında başarıyla kullanılır.Yeni ekipmanların benimsenmesi, birden fazla saflaştırma sisteminin karıştırılması, tekrarlanan ayırma ve diğer deneyim yöntemlerinin benimsenmesiyle, uzun peptid saflaştırmasının başarı oranı büyük ölçüde arttı.
Gönderim zamanı: Nis-18-2023